Пцр на иппп что это

Содержание

Пцр диагностика на иппп

Пцр на иппп что это

Лабораторная диагностика — это совокупность методов, которые помогают анализировать различные биологический материал при помощи специального оборудования. Для выявления инфекций, передающихся половым путем, существует несколько эффективных методов. Самым точным и быстрым является ПЦР.

В отличие от бак посева, который проводится в течение недели, ПЦР помогает выявить возбудителя в тот же день. Кроме того, при помощи такого исследования возможно обнаружить даже скрытые и вялотекущие процессы, когда количество возбудителя в организме минимально. Рассмотрим, что такое ПЦР диагностика и как она осуществляется.

Что такое ПЦР метод

Полимеразная цепная реакция или ПЦР — это метод исследования, который позволяет обнаружить нуклеиновые кислоты (ДНК) микроорганизмов, добиться повышения их концентрации в биологическом образце.

Метод используется в медицине не только в качестве анализа на ЗППП, но и для установления отцовства, для диагностики наследственных патологий.

Метод применяют и в экспериментальных целях для клонирования и выделения новых генов.

Метод ПЦР диагностики основан на возможности удвоения необходимого участка ДНК при помощи специальных ферментов.

Благодаря такому методу удается получить достаточный участок ДНК, чтобы подтвердить наличие того или иного микроорганизма. Таким образом, ПЦР помогает обнаружить даже скрытую инфекцию, если в образце присутствуют молекулы ее ДНК.

Особенно актуален метод полимеразной цепной реакции в венерологии, гинекологии и урологии для диагностики ИППП. Дело в том, что большинство инфекций развиваются медленно и никак себя не проявляют.

Кроме того, их сложно обнаружить при помощи других исследований из-за недостаточной чувствительности.

Особенно опасны вирусы, такие как ВПЧ (вирус папилломы человека), ВИЧ, гепатит, вирус герпеса которые могут приводить к инвалидности, смерти пациента, развитию онкологии.

Диагностика ИППП методом полимеразной цепной реакции помогает обнаружить единичные клетки микроорганизмов, что невозможно сделать при помощи микроскопического или бактериологического исследования. Также метод очень эффективен в диагностике внутриклеточных паразитов, например, хламидий.

Полимеразная цепная реакция показана пациентам, у которых можно заподозрить наличие инфекции, передающейся половым путем. Основные симптомы, которые могут выступать показанием к сдаче анализов:

Как правило, полимеразная цепная реакция показана, если пациент уже сдал ОАК и ОАМ, мазок из влагалища и уретры с микроскопическим и бактериологическим исследованием или ИФА (иммуноферментный анализ), а возбудителя выявить не удалось.

ПЦР используется не только для выявления ИППП, метод эффективен в отношении следующих инфекций:

  • гарднереллез;
  • сальмонеллез;
  • цитомегаловирус;
  • гепатиты;
  • токсоплазмоз;
  • краснуха;
  • мононуклеоз и др.

Анализ на скрытые инфекции нужно сдать не только тем пациентам, которые уже испытали на себе симптомы заболевания, но и в качестве меры профилактики, если планируется беременность.

Полимеразная цепная реакция показан людям, которые ведут беспорядочную половую жизнь и могли заразиться ИППП.

Преимущества и недостатки ПЦР диагностики

Современные специалисты при выборе метода диагностики ИППП рекомендуют именно ПЦР. Преимущества метода:

  1. Полимеразная цепная реакция очень чувствительна. Микроорганизм будет обнаружен, даже если он находится в организме в единичных количествах.
  2. Метод позволяет точно определить микроорганизм по его ДНК.
  3. Для диагностики подойдет любая биологическая жидкость — кровь, моча, слюна и тд. ПЦР проводят даже для оценки качества почвы и воды.
  4. Диагностика выполняется очень быстро, результат можно получить через 3 часа после сдачи материала.

Существует у метода и одна особенность, которую можно причислить к недостаткам. Так, полимеразная цепная реакция является сверхчувствительным способом диагностики, который может давать ложно положительные результаты.

Например, если недостаточно обработали оборудование, пипетку или тару, в которую помещают биологический материал, и в ней остался минимальный след ДНК какого-либо микроорганизма, при анализе ДНК размножится и заключение будет неверным.

Поэтому специалисты рекомендуют обязательно пересдавать биологический материал, особенно при очень негативном результате, и желательно в другой клинике. Также не стоит приступать к лечению, имея лишь анализ из лаборатории на руках, нужно обязательно проконсультироваться с врачом.

Подготовка к исследованию на ИППП

Любое лабораторное исследование требует исключить факторы, которые могут негативным образом сказаться на результате. К таким факторам относят:

  1. Прием лекарственных препаратов. Лекарства могут различным образом влиять на результаты исследования и вызывать непредсказуемые итоги. Нужно сообщить врачу по возможности прекратить принимать лекарства.
  2. Употребление алкоголя накануне сдачи материала.
  3. Физические и эмоциональные перегрузки.
  4. Приемы пищи.

Таким образом, чтобы правильно сдать кровь или мазок, необходимо:

  1. Отказаться от приема лекарств, не начинать заниматься самолечением.
  2. Кровь сдавать натощак.
  3. Собирать первую порцию мочи, доставить ее в течение 2 часов.
  4. Перед сдачей мазка гигиенические процедуры запрещены, не надо делать спринцеваний, нельзя использовать крема и свечи.
  5. Женщинам нельзя сдавать мазок сразу после ручного бимануального исследования.
  6. Отказаться от курения и алкоголя.

Если врачу необходим в результате возбудитель урогенитального воспалительного процесса, то пациенту рекомендуется перед сдачей мазка не мочиться в течение 3 часов. А вечером перед сдачей анализа нельзя мыть половые органы.

Не проводят лабораторную диагностику мазков у женщин во время менструации. Если у пациентки начались месячные, то сдать анализ можно только на 2 сутки после окончания кровянистых выделений.

Забор материала для исследования

Забор материала осуществляет несколькими методами, все зависит от вида инфекции. Для выявления ЗППП берут мазок у женщин из влагалища, шейки матки и уретрального канала, у мужчин из уретры.

Для взятия мазка женщина размещается на гинекологическом кресле. Во влагалище вводят стерильное гинекологическое зеркало. Гинеколог при помощи ватного тампона осуществляет соскоб со стенки влагалища и с шейки матки, который хранят в физиологическом растворе в холодильнике.

У мужчин мазок берут из цервикального канала. Врач использует ватный тампон, которые вводят в уретру. Собранный биологический материал также размещают в физиологическом растворе и в холодильнике. Затем материалы отправляются в лабораторию для дальнейшего исследования.

Кроме мазка для диагностики ИППП может быть исследована моча пациента.

Но этот метод является нежелательным, так как трудно добиться от пациента сбора идеального материала. Не стоит забывать, что в воздухе находятся частички слюны, пыль, в том числе и частицы ДНК микроорганизмов. В лаборатории постоянно проводят кварцевание и обработку помещения антисептиками, поэтому вероятность заражения образца извне минимальна.

Для ПЦР анализа можно использовать и кровь пациента. Обычно таким способом диагностируют герпес и цитомегаловирус, гепатит, ВИЧ. Образцы крови берут из пальца или из вены.

Полимеразную цепную реакцию секрета простаты проводят мужчинам, если имеется простатит и есть подозрение на наличие специфической инфекции.

Для взятие сока простаты проводят массаж предстательной железы через прямую кишку, в процессы которого и происходит выделение нескольких капель биологической жидкости.

ПЦР спермы сдают при бесплодии и эректильной дисфункции, так как есть подозрение на наличии инфекции в яичках.

Как проходит диагностика

ПЦР анализ проводят в специальном приборе, которые нагревает и охлаждает образцы генетического материала, он называется амплификатор. Чтобы начать исследования, из полученного биоматериала выделяют молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), они содержатся почти во всех клетках организма.

В процессе исследования необходимо амплифицировать (размножить) ДНК матрицу методом репликации (копирования участка), для этого используются праймеры ( короткие фрагменты ДНК, которые необходимы для соединение цепочек ДНК), ДНК-полимеразу (фермент) и другие необходимые компоненты, в частности буферный раствор, ионы магния и др.

В процессе подготовки материала к исследованию много раз двойную матрицу ДНК нагревают примерно до 95°C, чтобы разрушить водородные с вязи. Матрицы распадаются, затем температуру снижают до, чтобы праймер связался с каждой одноцепочной матрицей. Температурный режим зависит от используемых праймеров.

Если праймер прикрепился к цепочке ДНК и она размножилась, значит результат анализа положительный. Лаборант сделает вывод, что исследуемый возбудитель в организме обнаружен. Для каждого микроорганизма используют специальные праймеры.

Чтобы визуализировать изменения, при помощи фермента ДНК-полимеразы происходит копирование матрицы. Весь этот процесс повторяют от 20 до 35 раз. Когда появилось достаточное количество цепочек ДНК, производят их наращивание при необходимости, чтобы достроить одноцепочные фрагменты. В результате лаборант может визуально оценить результаты и составить заключение.

Какие инфекции выявляет комплекс ПЦР 12

В современных лабораториях пациенты могут пройти специальный комплексный анализ на ИППП, который называется ПЦР 12. Он позволяет обследоваться на 12 половых инфекций. Для исследования берут мазки из влагалища, шейки матки, уретры. Как правило, врач выбирает наиболее пораженную область.

Анализ ПЦР 12 поможет выявить следующие инфекции:

  • ВПГ (герпес 1 и 2 типа);
  • ВПЧ (штаммы нужно уточнить в лаборатории);
  • Хламидии;
  • Микоплазма;
  • Уреаплазма;
  • Гонококк;
  • Гарднерелла;
  • Трихомонада;
  • Кандида (вызывает кандидоз или молочницу);
  • Цитомегаловирус;
  • Мононуклеоз;
  • ВИЧ.

Результаты исследования можно получить на следующей день или через день после сдачи биологического материала. Как правило, длительность исследования зависит от загруженности лаборатории.

Расшифровка результатов анализа на ИППП

Результат анализа может быть положительным или отрицательным, поэтому каких-либо норм не существует.

Если в биологическом образце есть хотя бы минимальные следы патогенного микроорганизма, эта часть ДНК размножится и результат анализа будет положительным.

После получение результатов на руки пациенту настоятельно рекомендуется обратиться к врачу, а не пытаться самостоятельно диагностировать заболевание и лечить его. Дело в том, что даже если возбудитель обнаружен, это не значит, что обязательно нужно пить таблетки, особенно антибиотики.

Так, гарднереллу относят к условно-патогенным микробом. Ее нахождение во влагалище не значит, что нужно обязательно лечиться, тем более, если нет воспаления. Похожим образом дела обстоят и при обнаружении микоплазмы и уреаплазмы. Если никаких симптомов нет, достаточно укреплять иммунитет и регулярно обследоваться.

Герпес и ВПЧ — это вирусы, которыми заражены практически все люди на планете Земля. Таким образом, анализ на ПЦР может показать наличие вируса, но лечение пациенту не потребуется, если микроорганизм не вызывает появление высыпаний и других симптомов воспалительного процесса.

С другой стороны, если обнаружены трихомонады, гонококки, спирохеты, то нужно повторить анализ и быстрее приступать к лечению. Потому что терапию этих инфекций лучше начинать на ранней стадии, дабы избежать тяжелых осложнений — инфицирования внутренних органов, развития спаек и бесплодия, сепсиса и тд.

Инфекционный мононуклеоз — это очень заразное заболевание. Если его обнаружили, то пациента необходимо госпитализировать в инфекционный стационар. А при обнаружении ВИЧ пациенту требуется срочное обследование и специфическое лечение. Если не начать его вовремя, вероятно развитие осложнений и гибель больного.

Заключение

Полимеразная цепная реакция — это самый эффективный анализ на скрытые инфекции и ЗППП, который сейчас существует. Если есть подозрения, что пациент заразился ИППП, обследование нужно пройти в обязательном порядке. ПЦР диагностика являются доступным исследованием, стоимость которого варьируется от 500 до 2000 рублей, в зависимости от объема.

Положительный результата анализа — повод обследоваться у врача и начать лечение. Нужно помнить, чем раньше начинается терапия ИППП, тем больше шансов навсегда избавиться от патогенного микроба и забыть о неприятных симптомах заболевания.

 

Источник: https://venerolog-info.ru/pcr-na-ippp/

Как сдавать ПЦР на ИППП: расшифровка анализа

Пцр на иппп что это

ПЦР или полимеразная цепная реакция является высокоточным методом молекулярно-генетической диагностики, позволяющей выявлять разные наследственные и инфекционные недуги человека. Анализ даёт возможность обнаружить заболевание ещё до того момента, когда о себе дадут знать первые симптомы.

ПЦР была разработана американцем Кэри Мюллисом в 1983 году. А спустя 10 лет учёный был удостоен Нобелевской премии в области химии.

На сегодняшний день большинство медиков не представляют себе, как можно поставить точный диагноз, если не сдан ПЦР анализ. Он на самом деле стал настоящей находкой и для специалистов, и для пациентов. Метод позволяет выявлять активные стадии патологии даже тогда, когда не срабатывают иммунологические, вирусологические, бактериологические методы диагностики.

Преимущества ПЦР-диагностики

Разобравшись немного с тем, что такое ПЦР диагностика, необходимо сказать о неоспоримых плюсах методики.

К таким стоит отнести:

  • Точное выявление возбудителя в образце, который был сдан на исследование. Речь идёт о специфических участках РНК либо ДНК.
  • Благодаря высокой специфичности, есть возможность определять особый участок РНК и ДНК, который является характерным для определённого возбудителя. Это даёт возможность исключить ложные реакции.
  • За счёт высокой чувствительности можно обнаружить и единичные возбудители бактерий или вирусов. Чувствительность ПЦР анализа – 1000 клеток в образце, который был сдан на анализ. Что касается чувствительности микроскопических и иммунологических тестов, то она составляет не более 105 клеток.
  • Методика ПЦР является универсальной и даёт возможность из одной пробы выявить сразу несколько возбудителей.
  • >Результаты анализа могут быть готовы менее чем за 5 часов.
  • Выявление патогенов в доклинической диагностики (когда симптомы заболевания ещё не проявились) и в ретроспективной диагностике (когда человек уже переболел).

В чем заключается метод полимеразной цепной реакции

Диагностика ПЦР имеет большое значение тогда, когда материал, взятый на анализ, был на время отправлен в архив. А после, проводя исследования, специалисты могут узнать то, что им нужно. Например, установить отцовство или личность человека.

На сегодняшний день диагностика ПЦР заметно совершенствуется, появляются её разновидности, позволяющие сделать метод исследования более простым и доступным.

На чем основывается метод

Основой реакции является удвоение конкретного участка РНК либо ДНК в лабораторных условиях с помощью ферментов. В результате амплификации (удвоения) удаётся получить нужное количество ДНК, РНК, которые подвергаются визуальному анализу. Во время процедуры копированию подлежит участок, идеально подходящий под определённые условия и имеющийся в исследуемой пробе.

Допустим, есть исследуемый материал и в нём наблюдается наличие частичек РНК либо ДНК возбудителя. Это может быть кровь, моча, выделения из половых органов или слюна. Этот материал помещают в амплификатор – особенный реактор.

После этого добавляют ряд специальных ферментов – они связывают ДНК или РНК патогена, в результате чего получается хорошая копия. Нужно сказать, что копий может быть как несколько штук, так и несколько тысяч.

По завершении этого процесса начинается сравнение результатов с базой, в которой описано строение разных возбудителей.

Медицинский тест методом анализа крови, мочи, выделений из половых органов или слюны.

С помощью ПЦР будет возможность не только выявить возбудителя, но и назвать точное количество патогенов, которые находятся в человеческом организме.

Какие инфекции позволяет выявить ПЦР-диагностика:

  • ВИЧ-инфекцию.
  • Все виды вирусных гепатитов (а это А, В, С, G).
  • Цитомегаловирусную инфекцию (ДНК-CMV).
  • Инфекционный мононуклеоз (ДНК вируса Эпштейн-Барр -ВЭБ).
  • Туберкулез (найти микобактерию туберкулёза).
  • Герпетическую инфекцию (ДНК вируса простого герпеса ВПГ 1 и второго типа).
  • Венерические заболевания и половые инфекции (хламидиоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, микоплазмоз).
  • Листериоз.
  • Хеликобактерную инфекцию.
  • Онкогенные вирусы (папилломавирусную инфекцию и её онкогенные вирусы).
  • Боррелиоз, клещевой энцефалит.
  • Кандидоз – молочницу (выявляют грибы рода Candida).

И это далеко не весь список тех инфекций, которые можно определить при помощи теста.

Топовая статья:  Иммуноферментный анализ крови с расшифровкой показателей

ПЦР-тест – «золотой стандарт» при выявлении возбудителей большинства инфекционных заболеваний.

Принимая во внимание роль ПЦР, его назначают врачи различных областей. Это урологи, гематологи, фтизиатры, гинекологи, гастроэнтерологи, онкологии, инфекционисты и другие.

Правила забора материала для исследования

Если необходимо определить инфекции, передающиеся половым путём, тогда берут мазок на ИППП методом ПЦР, то есть используют соскоб с шейки матки, из уретры. Кроме этого, собирают выделения из полового члена у мужчин и влагалища у женщин.

Взятие мазка — один из способов диагностики

В случае, когда необходимо обследоваться на инфекции, например, гепатиты С и В, ВИЧ, мононуклеоз, вирус герпеса, токсоплазмоз и ЦМВИ, тогда берут кровь на ПЦР.

Нередко, когда с целью выявления ЦМВИ, необходимо сдать анализ мочи. А дабы определить вирус герпеса или инфекционный мононуклеоз, используют мазок из зева.

Намного реже в качестве исходного материала используется спинномозговая жидкость. Обычно это необходимо при поражении ЦНС человека.

Если говорить о внутриутробных инфекциях, то для их выявления используют ткань плаценты или околоплодные воды.

Топовая статья:  Мазок на ИППП: что это такое и зачем нужен?

В пульмонологии исходным материалом является плевральная жидкость либо мокрота.

Нужно сказать, что в качестве материала, используемого для исследования, может использоваться как жидкость человека, так и биологическая среда. Речь идёт о моче, мокроте, крови, соке простаты, плевральной жидкости, слизи и т.д.

Как подготовиться к проведению диагностики

Несмотря на то что взятый на анализ мазок ПЦР будет исследован в самое ближайшее время, а пациенту выданы его результаты, некоторые люди переживают относительно точности анализа.

Конечно, многое зависит от доктора, который берёт забор материала, приборов, но отчасти на процесс влияет и сам пациент.

Каждый, кто имеет факторы риска способствующие инфекционным заболеваниям,  должен знать, как сдавать ПЦР на ИППП и другие дисфункции организма правильно.

Только врач может определить серию необходимой диагностики.

Чтобы не было никаких сомнений в результате анализа, следует выполнять следующие правила:

  • Если сдаётся ПЦР на венерические заболевания, то нельзя заниматься любовью без барьерных контрацептивов.
  • При сдаче крови на ИППП и другие инфекции это делается исключительно натощак. Ни о каком утреннем чаепитии и завтраке не может быть и речи.
  • При сдаче мочи забирается только первая утренняя жидкость в чистую ёмкость.

Где сдать анализ и через сколько можно получить результаты

Что касается того, где сдать ПЦР, то сегодня есть возможность это сделать в любой частной клинике или лаборатории. В любом случае врач, который направит на анализ, подскажет, куда лучше обратиться. Что касается готовности результата, то его можно будет забрать через пару дней. Во многих случаях пациент получает «бумагу»  в тот же день.

Топовая статья:  Какие анализы сдают на сифилис

Расшифровка результатов

Есть несколько видов расшифровки, в зависимости от получаемого результата.

А именно:

  • Отрицательный результат. Он говорит о том, что на момент сдачи анализа в исследываемом материале не было замечено никаких инфекционных составляющих. В подавляющем большинстве случаев анализ именно такой.
  • Положительный результат. Если будет указано подобное, то можно с большой точностью сказать о том, что в исходном материале найдены следы определённых инфекций.

ПЦР тест

Иногда у людей обнаруживается так называемое «здоровое носительство». Это происходит тогда, когда человек чувствует себя хорошо, у него нет никаких симптомов, которые бы указывали на наличие инфекции, а анализ говорит об обратном. Такое бывает, когда сдаётся ПЦР на ИППП, на герпес, ВЭБ-инфекцию, ЦМВИ, ВПЧ и т.д.

Стоит знать! Если анализ ПЦР оказался положительным, человек является носителем определённой инфекции, которая может передаваться другим. Именно поэтому запускать ситуацию нельзя.

Нужно понимать, что все инфекции разные, одни требуют незамедлительного лечения, за другими необходимо только наблюдать. Решение, что делать дальше в этом случае должен принимать исключительно доктор. Специалист же на основе результатов поставит диагноз и назначит лечение, если оно требуется.

Что касается того, насколько точен анализ ПЦР, то для этого используют такие определения:

  • Максимальная точность (диагностика позволяет выявить наличие инфекции или «сообщить» об её отсутствии практически со 100% точностью).
  • Специфичность (выявление именно конкретной инфекции).
  • Чувствительность (даже если исследуемого материала мало, выявить возбудителя, в случае когда он есть, не составит труда).

Согласно исследованиям, ПЦР практически никогда не выдаёт неправдивых результатов. То есть, если инфекции нет, то и положительной пробы не будет. Крайне редко подобное бывает с хронической инфекцией, которая находится в неактивной фазе. В этом случае полимеразная цепная реакция может быть положительной.

Вам также может понравиться:

Источник: https://infemed.ru/diagnos/dop-anal/pcr-analiz.html

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Пцр на иппп что это

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В конце статьи см. словарь
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР – метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).
Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.
Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.
Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.
Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике – для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ – вирусов папилломы человека; в пульмонологии – для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии – для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний – в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии – для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.
Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами – короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 – 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.
Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 – 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий.

Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 – 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 – 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись.

Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 – 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 – 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 – 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C.

Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований.

После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 – 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО  в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой – позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Словарь

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота – биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.
РНК– рибонуклеиновая кислота – биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев – нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.
Нуклеоти́ды – основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию – адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) – гуанин, цитозиновый (C) – цитозин, тиминовый (Т) – тимин, урациловый (U) – урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов – A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа – A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК – рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.
Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. 
Литература

  1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9

Источник: https://www.invitro.ru/library/labdiagnostika/16110/

Пцр на иппп: что это за анализ, как проводится диагностика и что входит в комплекс обследования на половые инфекции

Пцр на иппп что это
Венерические заболевания — патологии бактериального, вирусного или грибкового происхождения, затрагивающие мочеполовую систему мужчин и женщин, которые при отсутствии терапии могут поражать другие системы органов. Обнаружить патологии подобного рода можно путем лабораторных исследований, одно из которых — мазок на ИППП.

Этот метод диагностики позволяет определить наличие патогенной микрофлоры в отделяемом веществе влагалища у женщин и уретры у мужчин. В клинической медицине он может называться также бактериоскопией или урогенитальным обследованием, но сути это не меняет.

Обычный мазок на ИППП остается одним из самых доступных и недорогих, но при этом высокоточных методов диагностики половых инфекций.

Что позволяет обнаружить

Инфекции, передающиеся половым путем — это очень широкий спектр заболеваний. Мазок на ИППП позволяет выявить большинство из них:

  • Хламидиоз.
  • Сифилис.
  • Гонорею.
  • ВИЧ.
  • Вирус папилломы человека.
  • Микоплазмоз.
  • Цитомегаловирус.
  • Уреаплазмоз.
  • Лимфогранулематоз.
  • Шанкроид.
  • Урогенитальный шигеллез.
  • Трихомониаз.
  • Герпес.
  • Гарднереллез.

Это список заболеваний, которые диагностируются у пациентов чаще всего. Важно знать о том, что мазок на ИППП позволяет обнаружить любые инфекции, находящиеся в секрете, который вырабатывается уретрой (у мужчин) и влагалищем (у женщин). Наиболее сложно диагностируются вирусы. Это обусловлено тем, что они настолько малы, что их очень трудно увидеть даже под микроскопом.

Анализ на ЗППП без мазка

Некоторые пациенты, особенно мужчины, часто боятся сдавать мазки.

Потому что это больно или как минимум неприятно.

Возможно, в большинстве клиник это действительно так.

Но только не в нашей клинике.

Мы используем обезболивание специальным гелем перед тем как брать мазок на ЗППП у мужчин.

Поэтому пациент ничего не чувствует.

Впрочем, существуют и другие методы диагностики половых инфекций.

Брать мазки не обязательно.

Большинство инфекций могут быть выявлены в другом материале:

  • моче;
  • эякуляте;
  • секрете простаты.

Исключение составляют вирусные патологии.

Для них мазки всё же являются обязательными.

Кроме того, возможно непрямое обнаружение возбудителей.

Для этого используются анализы крови.

В ней определяются антитела.

Это факторы иммунной системы.

Они специфичные – вырабатываются только к определенным возбудителям.

То есть, по наличию антител можно судить, если в организме инфекция или нет.

Показания

И у мужчин, и у женщин мазок на ИППП — это стандартная процедура, включенная в список ежегодных профилактических осмотров. Исследование назначается в обязательном порядке работникам, профессиональная деятельность которых связана с пищевой промышленностью.

С профилактической целью рекомендуется сдавать биоматериал не реже, чем 1 раз в год. Это актуально даже в том случае, если человека не беспокоят никакие тревожные симптомы.

В обязательном порядке нужно посетить врача и сдать мазок при появлении следующих признаков инфекций, передающихся половым путем:

  • Повышенная степень утомляемости.
  • Выделения из уретры, отличные от нормальных. Как правило, они имеют слизистый или гнойный характер.
  • Мутная моча.
  • Выраженный зуд и жжение в зоне гениталий.
  • Увеличенные лимфатические узлы в области паха.
  • Болезненные ощущения во время акта мочеиспускания.
  • Повышение температуры тела до субфебрильных значений.
  • Дискомфортные ощущения во время половых контактов.
  • Боль в нижней части живота.
  • Гнойники и язвы, образованные на наружных половых органах.

Это клинические проявления ИППП, характерные для лиц обоих полов. У женщин дополнительно могут возникать следующие симптомы: нарушение менструального цикла, раздражение в области заднепроходного отверстия, непривычные выделения из ануса, сыпь на половых губах, отек вульвы.

Специфические признаки ИППП у мужчин: наличие примесей крови в семенной жидкости, частые позывы к мочеиспусканию, проблемы с эякуляцией, болезненные ощущения в мошонке, сыпь на половом члене.

Кроме того, у женщин мазок на ИППП берется как при планировании беременности, так и во время периода гестации. Также обратиться к врачу рекомендуется как можно скорее после того, как был совершен сексуальный контакт без использования барьерных защитных средств.

Какой материал исследуют

В лабораторных условиях изучают:

  • кровь (для выявления сифилиса, гепатита, ВИЧ);
  • мочу (кандидоз, гонорея);
  • сперму (практически все ЗППП);
  • секрет уретры, влагалища, предстательной железы (большинство ЗППП);
  • слюну (микоплазмоз, кандидоз, хламидиоз);
  • ликвор (сифилис).

Внимание! Некоторые анализы для мужчин весьма болезненны. Мазок берётся при помощи тампона или зонда, которые вводятся в уретру.

Подготовка

Чтобы результаты исследования были максимально достоверными, необходимо строго следовать всем рекомендациям врача.

Правила подготовки к забору биоматериала:

Источник: https://daklinik.ru/diagnostika/kak-pravilno-sdavat-analiz-na-ippp-zhenshchine.html

Диагностика инфекций, передающихся половым путем (ИППП) методом ПЦР-анализа

Пцр на иппп что это

Что такое ПЦР-анализ?
ПЦР (полимеразная цепная реакция) – самый быстрый и достоверный метод диагностики инфекционных заболеваний. Чаще всего его используют для выявления инфекций передающихся половым путем (ИППП) и вирусных гепатитов.

Полимеразная цепная реакция (Polymerase chain reaction) была открыта Кэри Б. Мюллисом в 1983 году, за что он и был удостоен Нобелевской премии. Часто ПЦР описывают как метод, с помощью которого ученые могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

“Иглой” является крошечный фрагмент ДНК или РНК микроорганизма, характерный только для данного вида возбудителя заболевания.

В качестве исследуемого материала для ПЦР анализа могут использоваться различные биологические выделения (слизь, моча, мокрота), соскобы эпителиальных клеток, кровь, сыворотка.

Метод ПЦР диагностики существенно дополняет спектр традиционных методов и анализов, используемых в микробиологической диагностике. ПЦР диагностика эффективна для обнаружения микроорганизмов трудно выявляемых в лабораторных условиях, атипичных форм бактерий, внутриклеточных паразитов и микроорганизмов, способных длительно существовать в организме хозяина и вызывать хронические заболевания.

Как это делают? 1. Из биоматериала пациента в лаборатории с помощью специальных реагентов выделяется искомый участок ДНК/РНК. 2.

Затем проводится полимеразная цепная реакция, в результате которой количество специфических фрагментов возбудителя многократно увеличивается в результате чего становится возможной детекция.

3.

После этого с  помощью специальных маркёров определяется наличие (или отсутствие) фрагмента ДНК/РНК микроорганизма в биоматериале.

В лаборатории “Литех” используются надежные наборы реагентов для обнаружения ДНК возбудителей бактериальных и вирусных инфекций методом полимеразной цепной реакции, позволяющие контролировать не только ингибирование и адекватность постановки реакции, но и другие параметры: •    корректность забора клинической пробы; •    эффективность пробоподготовки; •    ошибки в проведении анализа (в т.ч. не внесение образца в амплификационную смесь); •    контаминацию на ранних стадиях (до стадии, обуславливающей необходимость повтора анализа).

Какие особенности влияют на результаты ПЦР анализа?

В зависимости от периода инфицирования и состояния иммунной системы у любого пациента может быть отрицательный результат даже при наличии инфекции.
В сомнительных случаях рекомендуется провести повторный анализ через 10-14 дней.

Как правильно подготовиться к сдаче ПЦР-анализа?
Выбор клинического материала для исследования определяется наиболее вероятным местом локализации возбудителя. При анализе ЗППП материал для исследования у мужчин – соскоб слизистой оболочки мочеиспускательного канала, который помещается в пробирку со специальным реагентом.

У женщин дополнительно берется на исследование содержимое влагалища, цервикального канала матки, уретры. Решение о выборе материала для исследования принимается врачом на основании совокупности жалоб пациента и клинических проявлений инфекции.

Взятие биологического материала, по возможности, должно проводиться в период обострения инфекции. Количество материала, забираемого для исследования, не должно быть избыточным, т.к.

вместе с возбудителем в пробу попадают вещества, которые могут вызывать тормозить ПЦР или могут способствовать разрушению ДНК при хранении и транспортировке. При взятии мазков и соскобов достаточное количество материала – размером “со спичечную головку”.

Наиболее адекватным инструментом для взятия соскобов и мазков для ПЦР-анализа является специальный одноразовый урогенитальный зонд (щеточка), который собирает необходимое количество эпителия, не травмируя слизистую, почти не впитывает образец и хорошо отдает собранный материал в жидкую транспортную среду.

Рекомендации:  •    приходите на обследование в период обострения инфекции; •    после незащищённого  полового контакта должно пройти не менее трех недель; •    закончите прием антибиотиков за 3 недели до исследования на ИППП; •    воздержитесь от половых отношений в течение 36 часов; •    во время менструации исследование не проводится. В день обследования на наличие ИППП: •    Не проводите туалет половых органов, не применяйте дезинфицирующие средства и антибактериальное мыло. •    От последнего мочеиспускания до взятия материала должно пройти не менее 3 часов. •    Материал для исследования у женщин следует брать перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. Женщинам нельзя спринцеваться; необходимо прекратить введение любых вагинальных свечей. •    По согласованию с лечащим врачом за 10 дней до взятия материала на исследование необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры.

Какие возбудители могут быть найдены при ПЦР анализе?

Bacteroides spp. (Бактероиды) – поражение женских внутренних половых органов: цервициты, эндометриты, аднекситы, ВЗОМТ инфекции в малом тазу. Обнаруживают бактероиды и при простатитах, хронических осложнённых уретритах.

Chlamydia trachomatis (Хламидия) – именно она чаще всего причина негонококкового уретрита у мужчин (23–55%)

Cytomegalovirus (Цитомегаловирус) – Цитомегаловирусная инфекция опасна при заражении матери во время беременности.

Epstein Barr virus (Вирус Эпштейна-Барр) – инфекционный мононуклеоз или болезнь поцелуев, кроме того является одной из причин лимфогранулематоза, причиной лимфомы Беркитта.

У многих людей, заражённых вирусом Эпштейна — Барр, болезнь проходит бессимптомно.

В настоящее время данному вирусу наряду с другими герпесвирусами приписывается важная роль в формировании опухолевых клеток в организме человека.

Gardnerella vaginalis  (Гарднерелла) – одна из причин бактериального вагиноза.

HPV (вирус папилломы человека) папилломавирусная инфекция, остроконечные кондиломы

HSV 1,2 герпес вирусная инфекция, генитальный герпес

Mobiluncus curtisii (мобилункус) – одна из причин бактериального вагиноза

Mycoplasma genitalium (Микоплазма) – негонококковые уретриты (12–25%), простатиты.

Mycoplasma hominis Микоплазма – негонококковые уретриты, простатиты, воспалительные заболевания матки и придатков, пиелонефрит.

Neisseria gonorrhoeae (Гонококк) – гонорея относится к “классическим” заболеваниям, передающимся половым путем (венерическим болезням). При этом заболевании возможно поражение мочеиспускательного канала (уретры), прямой кишки, глотки, шейки матки и глаз.

Toxoplasma gondii (Токсоплазма) –  Токсоплазмоз является одной из так называемых TORCH-инфекций (перевод первых букв латинских названий инфекций: токсоплазма, краснуха, цитомегаловирус, герпес), являющихся опасными для плода.

Trichomonas vaginalis (Трихомонада) – Трихомониаз является одним из наиболее распространенных венерических заболеваний. У женщин поражается влагалище, у мужчин – мочеиспускательный канал и предстательная железа.

Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Ureaplasma spp. негонококковый уретрит вызывается Ureaplasma urealyticum (20–40%) уреаплазмы являются условно-патогенными микроорганизмами. Они способны вызвать ряд заболеваний, но в тоже время нередко их выявляют и у здоровых людей.
 

Источник: https://analyz24.ru/poleznaya-informatsiya/nauchno-populyarnye-stati/nauchno-populyarnye-stati_135.html

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.